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燕窝的感官及理化鉴别方法

燕窝的感官及理化鉴别方法

燕窝的感官鉴别方法

真燕窝的外观和性状:完整者呈不整齐的半月形或船形,丝状结构,分层排列,呈现有规则的窝状,长6-10厘米,宽3-5厘米,半透明;表面黄白色或灰白色,一面较平,另一面微隆起,窝的内部粗糙,黄白色半透明丝状物互相交错构成丝瓜络状,放大镜下可见细小羽毛。干燥的燕窝质硬而脆,断面细腻,呈现角质样光泽。浸水后柔软膨胀,白亮透明,轻压有弹性。气微腥,味微咸,嚼之有黏滑感。

民间流传有鉴别真伪的秘诀:—看二闻三拉四烧五炖。

—看:燕窝应该为丝状结构,由片块结构构成的不是真燕窝;纯正的燕窝无论在浸透后或在灯光下观看,都不完全透叨,而是半透明状。

二闻:燕窝有特有馨香,但没有浓烈气味。气味特殊,有鱼腥味或油腻味道的为假货。

三拉:取一小块燕窝以水浸泡,松软后取丝条拉扯,弹性差,一拉就断的是伪品;用手指揉搓,没有弹力能搓成糨糊状的也是伪品;血燕和黄燕浸泡后变色的是伪品。

四烧:用火点燃干燕窝片,如果是真燕窝就绝不会产生任何剧烈声响的飞溅火星。

五炖:真燕窝炖后带有蛋白清香味、晶莹剔透、口感细腻爽滑、富有弹性;而假燕窝炖后有鱼腥味、明胶味,同时没弹性或成烂糊状。常见的感官鉴别方法汇总见表3一1:

燕窝的显微鉴别

1.器材

体视显微镜、高倍显微镜、干燥箱、研钵、电炉、剪、锡子、载玻片、燕网(过滤用,直径10cm)、200n让烧杯等。

2.显微透化的试液

甘油:水(1:1)200mL。

3.样品处理

(1)选取形态较完整样品进行体视镜观察。

(2)均匀取样,称取lg,60宅干燥2小时,取出,冷却室温,研末,供显微镜观察用。

4操作步骤

(1)立体显微:将样品在16-40倍体视显微镜下观察。

(2)粉末显微:取少许样品粉末于载玻片上,加2-4滴显微透化试液,粉末均匀分布,勿叠加堆积。

5.观察结果

(1)体视镜真品燕窝分层排列,具细密的平行纹理,立体清晰、呈现有规则的窝状;伪品或呈不规则颗粒状,或反光略强、反光呈流动性,分层不清晰,部分间有灰黑杂色。

伪品有一些主耍显微特征,如皮肚制品的脂肪油滴、鱼鲸的细波状纹理、银耳的网状或放射状纹。燕窝绒羽的显微特征也可用于燕窝显微鉴别。

(2)晁微镜在高倍镜下,真品燕窝呈类长方形,三角形或不规则形晶块,半透明,边缘平整,具光泽。表面及断面具细密的纹理,多平直或略弯曲,少见梭形纹理,有的呈放射状或弧状;有的团块隐约可见交叉的横向条纹,偶见不具纹理的小块片。有的可见少许灰色、棕色或灰黑色燕窝绒羽,绒羽形态较自然。

纯燕窝在25倍体视镜下的性状见图3-1,可见清晰的纹理,如玻璃状,有的还能见到棕色的羽毛、有色的杂质等。涂胶燕窝和掺假性状亦见图3-1,涂胶燕窝由于丝状物间隙被胶状物所填充,因此纹理不清晰,表面较光亮,有些还出现气泡。

一般理化鉴别

1.泡沫试验

有研究发现泡沫试验中,燕窝的泡沫占试管体积2/5,伪品无泡沫或泡沫少许。

2.荧光照射

燕窝在365纳米紫外灯光下显蓝绿色荧光;猪皮捏特亮的紫蓝荧光;淀粉显赞色或其他颜色荧光,或无荧光。

3.水解及显色试验

取样品约O.Sg,加水SOmL,加热使溶解后,取溶液Sn让,加重铭酸钾试液4份与稀盐酸1份的混合液数滴,正品燕窝不产生沉淀,明胶生成橘黄色絮状沉淀。取燕窝少盘加稀盐酸适员,煮10分钟,沸腾,正品燕窝显棕黄色或棕黑色,并有大量气泡并分散成碎片状。其他非燕窝样品不产生大量气泡。

4.灼烧实验

取少量干燥样品,置酒精灯下灼烧,正品燕窝会轻微迸裂、起泡、微烟微焦臭,炭化灰白,灰溶于稀盐酸。而伪品则产生剧烈声响并飞溅火星,不起泡,产生烟多,且炭灰不溶于稀盐酸。

紫外光谱法

1样品处理将白燕、血燕、银耳、琼脂、阴胶、猪皮分别称取1.0于100mL锥形瓶中,加水35mL,贸沸水中水浴2个小时,冷却 到室温,4000r/分离心,5分钟,吸取上清液用0.45μm膜过滤,滤液分别于200-400nm处进行紫外扫描。结果见图3-2,3-3。

2.结果燕窝酘大吸收在278nm,银耳260nm,琼脂、明胶、猪皮均没有明显的紫外吸收峰。

唾液酸含量测定

唾液酸在自然界分布很广,已经发现唾液酸存在于许多生物体内,随着生物进化程度的增加,唾液酸在生物体内的含量及其衍生物类型亦增加,进化程度较低的生物,如原生动物、星虫、环节动物、多孔动物、扁形动物、钮形动物、扩寸水母动物、节肢动物等均极少有或没有唾液酸的存在。在脊椎动物中普遍存在唾液酸,如鱼类、两栖类、爬行类、鸟类等动物。哺乳动物体内普遍存在唾液酸,其中在脑脊液和黏液中最多。聚唾液酸(Polysialicacid,PSA)是唾液酸以a22,8和/a或.22,9连接的同聚物,是少数几种的胞外多糖组分。聚唾液酸在细胞黏附、迁移和突触形成,在神经系统发育和重塑过程中起重要作用。

唾液酸是燕窝最为重要的具有生理活性的物质之一,且含量高达10%左右,这是燕窝掺假物所不具备的。因此,燕窝中唾液酸含量的高低就成为燕窝真假鉴别和质嚣判定的重要依据。

1、液相色谱法

(1)色谱条件:色谱柱为C18柱(4.6mmX150mm,Sμm),紫外检测器;流动相为0.05%磷酸水溶液,流速为O.Sn让/min,检测波长为192nm,进样体积为20μL。

(2))对照品溶液的制备:取N-乙酰神经氨酸对照品适祖,加超纯水制得mg/ml的对照品溶液。

(3)样品溶液的处理:将燕窝干燥含水榄在15%以下,研磨粉碎成粗粉。精密称取50.0mg,翌10011让具塞三灼瓶中,准确加入1.0闷舞酸40.0ml,称定质毋,于沸水中水解20分钟,不时摇动三角瓶,避免燕窝粉末挂壁。水解后迅速冷却室溫,补足减失质量,摇匀,用0.45μm的滤膜过滤滤液上机分析。

(4)结果:分别做了不同产地、不同季节的血燕和白燕样品及猪皮、明胶、琼脂等伪品唾液酸品测定,色谱图见图3-4。

结果示显,所有燕窝样品唾液酸含量均在6%以上(水分含量对检测结果有较大影响),不同产地、不同季节采收的燕窝样品含量略有不同。在猪皮、明胶、琼脂等伪品中均未检出唾液酸。该方法既能鉴别燕窝真假,也能判定燕窝品质高低。

性状和理化反应可以鉴别纯伪品,利用蛋白质电泳、紫外光谱法及HPLC分析方法可以鉴别掺伪品。燕窝中蛋白质含炽可以作为一个参照指标,文中唾 液酸的测定方法与文献相比具有稳定性好、准确度高、操作简单等特点,唾液酸含里测定可以用作鉴别和定量评价燕窝品质的重要方法。

2、分光光度法

(1)原理

用醋酸将燕窝中的糖蛋白水解释放出为唾液酸,唾液酸与酸性苟三酮形成稳定的苗色溶液,其颜色深浅与唾液酸含量成正比,用分光光度法测定吸光度,从标准曲线中得出唾液酸含量。

(2)实验

试剂及材料:冰醋酸、36%醋酸,37%盐酸,均为AR级。燕窝对照品,唾液酸标准品。

粒状活性炭:使用前千120°C烘2小时。

酸性茚三酮试剂:称取2.5g苟三酮,加入36%醋酸60mL和37%盐酸40mL,搅拌苟三酮全部溶解,即得微 黄色溶液。此试剂须新鲜配制当天用完,不用时,应贮存于冰箱中。

透析袋:能透过小于10,000分子扭的分子的透析袋都可用。燕窝糖蛋白的分子量为66,000,不会透过,留于透析袋中。

(3)实验仪器

天平、电热恒温水浴锅或 加热回流装置、匀浆机、离心机、筛网、研钵、烘箱、分光光度计。

(4)样品处理

a)固体燕窝样品:在105C烘箱中烘干,冷却后研磨,过100目筛,称取0.12-0.13g(m)粉末到三角瓶中,加入30%醋酸溶液20n让。加沸石数颗,加热回流10分钟,冷却后,转移到100n让容揽瓶,并用水定容。摇匀后倒出lOn让到加有1.2g硫酸铁的离心管中,用玻棒搅匀,使硫酸较溶解,3000rpm离心10分钟,上消液备用。

b)取冰糖燕窝1瓶(约70-lOOmL),测蜀其体积后放入匀浆机中,加入与制品同体积的水,匀浆5分钟,以便均匀取样。

取出匀浆物SOmL覃透析袋中,流水透析24小时,以除去干扰测定的糖。吸取透析液10mL,加入10n止60%醋酸溶液,回流水解10分钟,取一半水解液于离心管中,加入1.2g硫酸钦,搅拌溶解,离心,然后按测定燕窝固体的力法测定吸光度,半行测定两次,取均值。

C)如燕窝制品为冰糖人参燕窝,则透析、水解后,除加入硫酸按,还须加入溶液中的5%活性炭,以除去人参的干扰,然后按前法测定吸光度。如果燕窝制品很浓稠,在 加热水解时容易焦糊,则需根据固形物大致含炽而适当减少取杆尽,如只 取Sn让,加入Sn让水,再加入60%醋酸溶液lOmL,后续步骤如上。

(5)测定

取上洁液2mL隍千lOmL比色管中,加入茚二酮指示剂2mL与冰醋酸2mL,摇匀,在100°C水浴中反应10分钟,立即取出试管在流水中迅速冷却,用1cm比色皿,在470nm波长处测定吸光度OD。同时做空自试验。

(6)唾液酸工作曲线

先配制200μg/mL的唾液酸标准溶液,再逐级稀释到100μg/mL、50μg/mL、20μ,g/mL、10μ,g/mL、5μg/mL。分别吸取2mL系列浓度标液,加入2mL茚三酮溶液和2n让冰醋酸,加热反应,冷却后比色,测定吸光度。得到唾液酸系列浓度(X)对应吸光度(y)的上作曲线、见图3-5。燕窝样品中唾液酸含

拭的计算公式:X(%)=cx100x100/(1000*m*1000)。其中,c为由工作曲线得到的提取液中唾液酸浓度,μg/mL;m为称样单位为克(g)。

冰糖燕窝或人参燕窝等制品,应根据取样量和稀释倍数确定唾液酸的计算公式。

(7)分光光度法的测定低限唾液酸含呈的检测低限应达到lmg/kg

分光光度法的吸光度检测低限按0.001,固体燕窝称样量为0.12g,液态燕窝制品称样量为5-10g,依据测定公式,唾液酸含挝的检测限为0.0001%,l mg (以液态燕窝制品称样量为10g计)。

(8)干扰和干扰的消除

干扰实验证明,掺假物银耳、猪皮、鱼骠、明胶、琼脂、卡拉亚胶、卵浩和人参等的水提物都会和芹三酮产生一定的吸光度,从而导致5%-20%的相对误差(对燕窝而言),其中以人参的干扰最为严重。

用(NH4)2S04法去除人参以外的掺假物的干扰取得了良好的效果,干扰被消除。此法能消除干扰的原理是分步沉淀了掺假物中的蛋白质,而这些絮状蛋白质沉淀会吸附带走一些干扰测定的色素等物质。

人参的干扰要采用硫酸按-活性炭吸附法。这是由于人参中含有较多的植物色素,活性炭的强吸附力能除去这些色素。

试验证明,不同比例量的燕窝掺入不同比例量的掺假物提取物,用上述方法排除干扰后测出的唾液酸含量与实际的加入且基本相同,相对误差小于5%,这说明建立的消除干扰的方法是可行的。

燕窝制品中含有大虽的冰糖。试验证明,糖对燕窝测定有严重干扰。燕窝制品与苗三酮直接加热显色形成酱黑色物,质无法且接进行测定。采用24h透析法将糖排除以后可按前述的测定燕窝固体的方法测定。

(9)氨基酸类物质的干扰情况

化学物质中可以与菲三酮发生比色反应的包括氨基酸、氨和许多一级胺化合物等,其中部分物质的分子结构是与唾液酸(N-乙酰神经氨酸)相似。选取18种氨基酸,模拟燕窝加醋酸水解的环埮,令其与茚三酮反应,结果见表3-2:

上表中氨基酸与茚三酮的显色吸光度也普遍很小,具中半胱氨酸、脯氨酸、色氛酸、酪氨酸、组氨酸、天门冬氨酸的显色吸光度大,但显色现象也与燕窝的显色有差异。

(10)各种燕窝及制品的检测数据

采用该方法测定了约300多批次燕窝,其中固体燕窝居多,种类包括白燕、血燕、贫燕(金丝燕)、毛燕、洞燕、屋燕、官燕等。产地主要是印度尼西亚、马来西业、菲律宾、泰国、韩国等。

液态燕窝制品主要包括冰糖燕窝、冰糖银耳燕窝、花旗参燕窝、雪蛉燕窝、即食燕窝和燕窝提取液等。

固体燕窝的唾液酸含里因品质不同而相差很大。外观较平整,呈盏型或窝片型燕窝的唾液酸含虽一般在10%左右。如果含毛 、草等杂质多燕窝的唾 液酸含量范围在0.26%, 0.5%, 1.0%, 5.0%, 7%, 10o/0:不等。上述结果都是按干基计。

即食燕窝制品中唾液酸含员范围在0.01%-0.2%之间。

3.液相色谱-串联质联用法

(1)燕窝样品前处理

参考分光光度法,称甘、水解、离心、稀释、上机。采用唾液酸标准品作质谱参照。

(2)仪器条件:

a)液相色谱条件

色谱柱:ThermoHypersil Gold C18,150X2.lmm,3μm;或其他同等性能的色谱柱。柱温:40°C。

流动相:采用甲醇和甲酸按盐(5n1Mol/L)来配制,二者的混合配制体积比为4:6。流速:200μL/分钟。

进样量:5μL

b)质谱条件

离子源:电喷雾(ES!)

扫描方式:负离子扫描<

检测方式:多反应监测模式(MRM)

雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体;使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求,喷雾电压等电压值应优化灵敏度。

监测离子对:m/z308/87,170,262,定鼠离子对:m/z 308/87。

c)液相色谱-质谱/质谱法测定:定性测定

被测组分选择1个母离子,2个子离子,在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在+2.5%之内;且样品谱图中被测组分监测离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表3-3规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物

d)液相色谱-质谱/质谱法测:定量测定

根据试样中被测物的含量情况,选取相应值相近的标准工作液一起进行色谱分析。标准工作液和待测液中的响应值应在仪器线性响应范围内。对标准工作液和样液等体积掺插进行测定。在上述色谱条件下唾液酸标准溶液的质谱图见图3-6,图3-7。

(3)检测结果

选取多种样品,分别采用分光光度法和液相色谱-串联质谱法来测定其唾液酸含屈,两种 方法对比结果见表3-4。可见两种方法得出的结果基本一致。

电泳法

电泳鉴定是以燕窝所含水溶性蛋白质为分析基础,已经证明燕窝的蛋白质是燕窝药效的物质基础之—。因此,理论上电泳中蛋白质谱带的位置、显色的深浅可很好地反映燕窝的真伪和质量,但由于燕窝蛋白富含唾液酸,影响其电泳分离效果。本方法采用的双向电泳法,结合了等点聚焦和SDS垂直电泳技术,明显增强了蛋白质分离效果。

1单向凝胶电泳

(l)样品处理

窝及伪品均称取lg,加纯水20mL,于45°C水浴3小时,用0.45μ,111膜过滤,得上清液。上清液与凝胶加样缓冲液按1:1混后合,沸水浴100°C加热5分钟,上样,在恒压200V下进行以浓缩胶浓度5%,分离胶浓度15%,以考马斯亮蓝染色,凝胶图像扫描仪扫描困像,分析结果。

(2)结果

燕窝样品电泳诏带清晰,在相对分子质量3万以上有7-8条谱带,伪品中银耳¬在相对分子质量4万以下有3条谱带,其他伪品没有消晰谱带,详见图3-8。2双向凝胶电泳法

(1)主要试剂

胺、甲义双丙烯酰胺、SDS、7cm预制PH4.7-5.9梯度胶条、100X两性电解质(PH4.7-5.9,PH6.3-8.3)、蛋白质纯化试剂盒、水化上样缓冲液、胶条平衡缓冲液I、胶条平衡缓冲液[I、低熔点琼脂粮、蛋白质分子撮标准、矿物油、DTT、碳乙酰胺、考马斯亮蓝G250、过硫酸按等。

(2)蛋白质提取

将样品充分研磨,称取500mg千50mL离心管中,加10mL水,4°C放置24小时,1000xg离心10分钟,吸取800μ1上清于l.SmL离心管中,共6管。真空离心浓缩3小时,液体缩减约200μL。使用蛋白纯化试剂盒进行蛋白除盐,冷冻干燥后用300μL上样缓冲液浴解,具体操作是通过超声破碎辅助,用上样缓冲液依次溶解所有6管蛋白。12000Xg离心5分钟,取上清进行等点繫焦。每个样品制备两份蛋自上消,同时进行等电 聚焦和SDS-PAGE。

(3)等电聚焦

将IGP胶条于室溫放置10分钟,沿若聚焦盘中槽的边缘从左右线性加入蛋白样品。存梢两端1cm左右不要加样,中间样品液保持连贯,去除气泡。用锐子去除lPG胶条保扩层,轻轻将!PG胶条胶面朝下翌于聚焦盘样品溶液上,使胶条正极对应于栗佳盘正极。去除气泡。在胶条上覆盖3n止矿物油。盖上盖子,设四等点聚焦程序:水化SOV12h,线性250V30min, 快速SOOV30mi11,线性4000V3h,快速4000V20000Vh,快速500V任意时间。

聚焦结束后,立即进行平衡和第二向SDS-PAGE电泳,否则将胶条置于水化盘中-20°C保存。

(4) 垂直电泳

配制10%聚丙烯酰胺凝胶(7cmX7cm)。将聚焦好的!PG胶条胶面朝卜放在干的厚滤纸上,另将一份滤纸用水浸湿,直接置千胶条上,吸干胶条上矿物沽和多余样品。将胶条放置于水化盘中,加入2mL平衡缓冲液I,缓慢摇15分钟,取出胶条,竖立在滤纸上去除 多余液体,将胶条放置于水化盘中干净的槽中,加入平衡缓冲液II,摇15分钟,同法吸取胶条上多余液体,将胶条胶面朝土放在聚丙烯酰胺凝胶的长玻璃板上,用少昆热的低熔点琼脂糖封胶液滴在玻璃板上,同时使用锻子,轻轻将胶条推入凝胶胶面,不要在胶条下放产生气泡。同时在分子址孔中加蛋白质分子盟标准品。用封胶液封闭胶条。凝固后,将凝胶转移电泳槽中。加电泳缓冲液,进行电泳,电压设置为SOY30nun,100V3h,浪酚蓝指示剂到达底部。

(5)染色与成像

电泳结束后,轻轻撬开玻璃,取出凝胶,用固定液固定2小时,再用染色液染色1小时,用脱色液脱色背景干净。用凝胶成像仪成像。使用双向电泳图像分析软件将图谱转换成商斯图谱。

(6)燕窝双向电泳图谱特征图3-9是9份燕窝标准样品的双向电泳图谱

图3一10是最常见的掺假物银耳和燕窝混合物的双向电泳图谱。燕窝图谱的特征包括:a)蛋白点为渠中分布在图谱中央位翌的2-4行平行的蛋白点群(椭圆形和方形标识的棱式);b)蛋白点分子量集中在41KD-28:KD;c)蛋白点等电点基本位于4.7-5.9中间以及偏酸位置。银耳燕窝混合物图谱显示含50%银耳的样品能明显检测到掺假物蛋白(虚线标识),20%的样品图谱中掺假物蛋白较弱,但尚能识别。因此,本法对银耳的检测灵敏度可达到20%。另外,应当看出,不同产地和不同等级燕窝的图谱有一些差异,主要表现为蛋白点的深浅、数扭等电点方面,反映了不同品种金丝燕的生物屈性差的异以及环制境备和方法导致的燕宽品质的差别,但由于不同燕窝样品的图谱都具有明显的共同特征,因此局部的差别不仅不会对真假燕窝的判断带来影响, 而且为不同产地和不同等级燕窝之间的鉴别提供了丰富的信息。

(7)双向电泳方法的重现性

双向电泳图谱的重现性对本方法的实用性关重要。研究人员对—个燕窝标准样品分别进行了三次蛋白质提取和双向电泳实验。结果如图3-11所示,A、B、C三个图谱的样品量依次为50mg、80mg、100mg。三个图诺重现性良好,蛋白点着色强度随样品置增加而增加。

(8)结果判定

图谱仅显示典型的燕窝图谱特征者,可判定样品为燕窝纯品。

图谱同时显示燕窝图谱特征和掺假物蛋白点,可判定为燕窝掺假品。

图谱不出现典型的燕窝特征,仅出现掺假物蛋白点,可判定为燕窝伪品。

图谱无任何蛋白点,需重复实验,重复结果仍无蛋白点,可判定为燕窝伪品。

分子生物学方法

实时荧光PCR法已被广泛应用于物种鉴定,可用于燕窝制品中燕窝成分的快速检测。

1.材料

(1)样品种类及来源

4份熬窝样品由药店提供,另5份燕窝样品(白燕盏)从口岸进口和市场抽查中获得。苞、大豆、胡萝卜、黄瓜、鸡、鹿、米、木瓜、牛、芹菜、土豆、兔、西瓜、鳍鱼、鸭、羊、玉米、猪、银耳等19份样品购自市场。

(2)试剂盒

Nucleospin 食品DNA纯化试剂盒.SYBRgreen MasterMix试剂盒。

2.DNA提取

将样品粉碎,称取40mg样品粉末,按照试剂盒说阴书提取核酸DNA和纯化,产物溶于50μL水。

3.实时荧光PCR采用SYBRgreen MasterMix试剂盒,按照25μL休系配制反应液,其中校板体积5μL。引物及反应参数。

3.实验结果

(1)实时荧光PCR法特异性

燕窝DNA提取存在一定难度,采用常规方法往往需要较大的样品(500mg-]g),不便于操作,而且DNA质倡不理想,扩增效率低。本课题组采用50mg样品叶,对两份熟窝标准样品分别采用CTAB法,Wizard磁珠试剂盒和Nucleospm试剂盒法提取DNA后进行Cfib扩增,发现只有Nucleospin试剂盒法提取的DNA扩增出目的条带,产物阴亮,且无非特异条带,表明DNA质址良好。

针对燕窝纤维蛋白原基因和NADH脱氢酶基因分别设计引物,通过筛选得到Cfib和NA体系。如图3-13,图3-14所示,两个引物均显示良好特异,而且双引物的应用有助于提高检昶准确性。由于燕窝产地不同,品种不同,因此需要对个同产地来源燕窝样品检查引物的涵盖范围。如图3-15,图3—16所示,两个引物对9个燕窝样品均得到Tm值一致的信号峰。

(2)实时荧光PCR法灵敏度

图3一17是Cfib体系的灵敏度实验结果,可检测到0.5%的芞窝/银耳混合物。NA体系具有相同的灵敏度。

4.结果判定

样品的Cfib和NA体系均出现燕窝特异峰,判定样品含有燕窝成分,表述为样品含有燕窝成分;样品的Cfib和NA体系均未出现燕窝特异峰,判定样品不含燕窝成分,表述为样品不含有燕窝成分;样品的Cfib和NA体系少有一个出现二聚体和燕窝特异峰以外的信号峰,判定样品含有非燕窝成分,表述为样品含有非燕窝成分。

5.唾液酸检测与荧光PCR法结合鉴定燕窝真假

挑选40个有代表性样品进行两种方法对照,结果见表3-7:

结果显示,40个样品中有16个是假燕窝,当唾液酸含拭低千0.1%时,荧光PCR法鉴定结果显示为“阴性”,表阴两种方法在判定燕窝哀伪时,结果一致。

红外光谱法

随着计算机的飞速发展和傅里叶变换红外光谱仪器的不断革新,使红外光谱法( FTIR )广泛地被应用在多种学科领域。

1实验部分

(1)仪器设备和参数设瞿仪器设备:美国Perk in-Eln1er公司SpectrumOne傅里叶变换红外光谱仪和通用衰减全反射附(universalATRsamplingaccessory),硅碳棒光源,DTGS检测熬。4cm-1分辨率,16次扫描累加。

(2)样品来源和制备

样品来源:6种天然燕窝均中燕窝贸易商提供。

样品制备:均匀性鉴定是将大块状燕窝研磨后纯样品直接压片放在微ATR附件的钻石探头处测定;非均匀性鉴定是在燕窝上取不同的小块颗粒(大3mm)样品官接测定。

2.结果与讨论

利用FTIR光谱法测定了6种燕窝:印尼燕、越南燕、马来西亚燕、泰国血燕、菲律宾草燕和香港市售燕窝的红外光谱。这6种燕窝均有自己独特的FTIR谱图,红外 光谱图较特征。

(1)6种燕窝的红外光谱分析

燕窝的主要化学成分为多种蛋白质和氨基酸。如图3-18所示,红外谱在2925cm-1附近的峰为CH2-和Cl-31-的吸收峰,在1634cm一1、1534cm一1、1034cm一1附近的吸收峰为蛋白质、氨基酸和多糖类的特征吸收。

6种燕窝的红外谱图峰形较相似(见囡3-18),但吸收峰的相对强度和波数位四差异较大。印尼燕的蛋白质、氨基酸和多糖类含盄较丰,富1023cm一1的吸收峰较强,与酰胺I带(1634cm一I)的峰强相当。越南龚和泰国血燕在2925cm-1有较明显的吸收峰,而其他燕则在此处无吸收峰。印尼燕在2937cm一1,马来西亚燕则在2970cm一1有吸收峰,而菲律宾草燕在2938cm-1,香港市售燕窝在2960cm- 1有弱吸收峰。印尼燕的波数位置与其他类燕窝相比相差了十多个波数。

(2)6种燕窝的非均匀性分析

分别选取6种燕窝4种不同位嚣的小颗粒测定红外光谱图(见图3-19):印尼燕(图3-19a)不同颗粒的谱图差别较大,有粒酰胺I、II和1032cm一1的吸收峰较强;另一个颗粒是1598cm一l、1029cm一1的吸收峰较明显;另两个颗粒是1634cm,-、1400cm一1和1028cm-1的吸收峰较突出。越南燕(图3-196)与印尼燕的谱图较相似,但未发现1598和1029cm-1的特征谱图。马来西亚燕(图3-19c)酰胺I、II和1033cm一1的吸收峰较强的颗粒较多。泰国血燕(图3-19d)每个颗粒都有871cm一1的特征吸收。菲律宾草燕(图3-19e)谱图的相似度较大。香港市售燕窝(图3-19f)也与菲律宾草燕的谱图一样。谱图表明印尼燕、越南燕、马来西亚燕、泰国血燕4种燕窝的均匀性较差,菲律宾草燕和市售燕窝的均匀性较好,这与燕窝的加工条件有关,一般天然燕窝均匀性会较差。显微鉴别进一步证明了香港市售燕窝中含有伪品:猪皮屑和银耳。

(3)燕窝和猪皮屑的红外光谱图比较

贵重的燕窝在商品市场上经常会碰到价格高低悬,殊这与燕窝的来源和加工有关。一些燕窝伪品也扰乱了市场。图3-20是猪皮屑、银耳与燕窝的对比光谱图。猪皮屑和银耳的红外光谱有较大的特征性,天然燕窝在2925cm一1附近的吸收峰强度较弱,而银耳和猪皮屑则在此处吸收较强;猪皮屑的蛋白质、氨基酸类化合物含星较丰富,即酰胺I、II带A(1629cm一1、1531cm一I)的吸收峰较强,1039cm一1附近的吸收峰较弱;银耳和猪皮屑在1734cm一1附近会出现脂肪类化合物的特征吸收峰,银耳在1021cm.1-的吸收峰很强,这是区别燕窝中是否掺有猪皮屑和银耳的判别依据。

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